Připravili jsme pro vás pracovní protokol pro použití GeneRuler 50 bp DNA Ladder. Jedná se o postup pro dimenzování a přibližnou kvantifikaci širokého spektra dvouřetězcové DNA v agarózovém nebo polyakrylamidovém gelu. Žebříček se skládá ze třinácti individuálně chromatograficky čištěných fragmentů (v párech bází) 1000, 900, 800, 700, 600, 500, 400, 300, 250, 200, 150, 100, 50. Pro jednoduchou orientaci obsahuje dva referenční proužky (500 a 250 bp). Žebříček je rozpuštěn v TE pufru.

Specifikace GeneRuler 50 bp DNA Ladder

Skladovací pufr
10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 1 mM EDTA
6X DNA Loading Dye
10 mM Tris-HCl (pH 7.6), 0.03% bromophenol blue
0.03% xylene cyanol FF, 60% glycerol and 60 mM EDTA

Certifikáty analýz

  • Dobře definované proužky jsou formovány během elektroforézy na agarózovém gelu.
  • DNA koncentrace se určuje spektofometricky.
  • Nepřítomnost nukleázy je potvrzená přímým nukleázovým testem.

Protokol na použití GeneRuler 50 bp DNA Ladder

Složky Gely
Agarózový Polyakrylamidový
DNA Ladder (0,5-1µg) 1-2µL 1-2µL
6x DNA Loading Dye 1µL 0.5µL
Deionizovaná voda 4-3µL 1.5-0.5µL
Celkové množství 6µL 3µL

ROK 1: Promíchejte jemně všechny složky
KROK 2: Naneste na gel

Doporučení, jak postupovat při dimenzování a kvantifikaci DNA

  • Před nanesením nevařte.
  • Nařeďte vzorek DNA 6X DNA Loading Dye (#R0611, supplied with the ladder): smíchejte 1 objem barvícího roztoku dye roztoku s 5 objem DNA vzorku.
  • Nanášejte stejné objemy DNA vzorku i  DNA žebříčku.
  • Pro kvantifikaci - přizpůsobte koncentraci vzorku aby odpovídal koncentraci nejbližšího proužku.
  • Nepřidávejte barvičku do vzorku, ale obarvěte gel po elfu, nebo přidejte barvičku do gelu, jinak můžete ovlivnit odlišný průběh migrace.
ANCHOR_TOP_TITLE

Tento web využívá cookies

Pro chod webu jsou nezbytně aktivovány esenciální soubory cookies. Pro plnohodnotné poskytování služeb, personalizaci reklam a analýzu návštěvnosti jsou však nutné povolit i volitelné cookies. Kliknutím na následující tlačítko, je zapnete. Zobrazit podrobnosti

Nastavení cookies

Vaše soukromí je důležité. Můžete si vybrat z nastavení cookies níže. Zobrazit podrobnosti