High-throughput genotyping je moderní metoda sekvenování nové generace (NGS), ideální pro ultra-senzitivní, vysokokapacitní projekty genotypizace, zejména pro ověření cílených experimentů s úpravou genů pomocí CRISPR. Pokroky v technikách úpravy genomu, zejména CRISPR/Cas9, výrazně usnadnily inženýrství buněčných linií, cílení genů a vývoj transgenních modelů. Přesto zůstává přesná identifikace správně cílených buněk významnou překážkou pro rozsáhlé projekty.
Naše patentovaná služba vysokokapacitního genotypování, genoTYPER-NEXT™, je efektivnější a účinnější přístup než testy T7E1, TIDE a IDAA pro screening cílených buněčných linií. Nabízíme také cílená, celogenomová a ampliconová NGS řešení pro analýzu na- a mimo-cílových efektů úpravy genomu.
Jak ověřujete úpravu genů pomocí CRISPR?
Úprava genů pomocí CRISPR je ověřována pomocí polymerázové řetězové reakce (PCR), Sangerova sekvenování nebo NGS. Tyto techniky se používají k identifikaci a ověření genových modifikací v rámci upraveného vzorku DNA.
Co je to cílová validace CRISPR-Cas9?
Cílová validace CRISPR-Cas9 je potvrzení vybraných sekvencí vodicí RNA (gRNA) a její specifity k zájmovému genu. Tato metoda zahrnuje analýzu dalších genomových lokusů, které sdílejí sekvenční podobnost s vybranou gRNA, a jejich porovnání s nekontrolními kontrolami (gRNA cílená na nefunkční oblast), aby se zajistilo, že gRNA převážně cílí na zamýšlený genomový lokus. Funkční důsledky úpravy genů, jako je knockout genu a následná absence exprese proteinu, jsou potvrzeny a kvantifikovány pomocí kvantitativní PCR (qPCR) nebo hlubokého sekvenování.
genoTYPER-NEXT: VYSOKOKAPACITNÍ TEST PRO OVĚŘENÍ CRISPR
1. ODESLÁNÍ VZORKŮ
Odešlete CRISPR upravené buněčné linie v 96-jamkových deskách
2. AMPLIFIKACE NA/MIMO CÍLOVÉ MÍSTO
Lýza buněk a PCR s čárovými primery
3. SEKVENOVÁNÍ
Vzorky jsou sloučeny a sekvenovány na platformě Illumina®
4. INTERAKTIVNÍ ANALÝZA DAT
Vizualizujte výsledky v prohlížeči genoTYPER-NEXT Prohlédněte si naše další NGS služby pro ověření CRISPR
ZJEDNODUŠTE SI CESTU K OBJEVŮM
Řešení od genu k objevu Balení AAV, vlastní syntéza mRNA, balení lentiviru, produkce rekombinantních protilátek
VLASTNOSTI A VÝHODY
Kompletní řešení od vzorku k odpovědi, počínaje buňkami až po genotyp (prozkoumejte naši interaktivní zprávu; vyžaduje přihlášení) Automatizovaný, vysokokapacitní pracovní postup – až 10 000 vzorků na běh Bezproblémové - Vyhněte se extrakci gDNA, předběžnému screeningu před sekvenováním a TA klonování Vysoce citlivé – Detekce <1% frekvence alel, plné rozlišení INDEL a analýza posunu rámce
A to vše můžete mít i vy! Objednejte si naše služby a posuňte svůj výzkum na novou úroveň.