Lineární vektor pGK1.1 obsahuje dvě složky: expresní kazetu Cas9 nukleázy a klonovací kazetu pro naváděcí RNA (gRNA). Navrhnutý fragment DNA kódující cílovou CRISPR RNA (crRNA) může být rychle a vysoce účinně klonován do klonovací kazety gRNA.
Screening pozitivních klonů po transfekci lze snadno a efektivně provést štěpením enzymem KOD (knockout detection), který má silnou endonukleázovou aktivitu. PCR produkty cílové oblasti z jednotlivých klonů jsou denaturovány a potom znovu spojeny za vzniku heteroduplexní DNA. KOD enzym může efektivně a specificky rozpoznat a štěpit mismatch místa v heterogenních duplexech DNA.
Knockout detekční kit (KOD) poskytuje jednoduchou a vysoce účinnou metodu pro detekci genového knockoutu a genového polymorfismu. Základní složka kitu je knockout detekční enzym (KOD), který má silnou endonukleázovou aktivitu a je homologní s Cel. KOD enzym může účinně rozpoznat a štěpit mismatch místa v heterogenních duplexech DNA.
Kit KOD může být široce použit pro detekci genového knockoutu u savců, bakterií, hub, virů a rostlin, zvláště je použitelný pro skríning pozitivních klonů a detekci účinnosti knockoutu pomocí technologií CRISPR / Cas9, TALEN nebo ZEN.
