Pro sledování nukleových kyselin používáme fluorescenční barviva, která se váží na molekuly nukleových kyselin.
Hledaný výraz musí mít více jak 2 znaky.
Pro sledování nukleových kyselin používáme fluorescenční barviva, která se váží na molekuly nukleových kyselin.
Abychom nukleové kyseliny (NK) během práce s nimi mohli sledovat, obvykle je určitým způsobem označíme, což umožňuje jejich následnou vizualizaci. Typy značení lze rozdělit do dvou skupin (radioaktivní a neradioaktivní).
Nukleové kyseliny jsou nejčastěji značeny enzymaticky a k inkorporaci značky dochází buď po celé délce řetězce (průběžné značení), nebo na jeho konci (koncové značení). Pro průběžné značení jsou nejvíce používány tyto enzymy:
Při koncovém značení jsou značené nukleotidy připojeny na 3’ nebo 5’ konec řetězce NK. Pro tento způsob značení jsou využívány hlavně tyto enzymy:
Thermo Scientific Biotin Chromogenic Detection Kit je vhodný nástroj pro chromogenní detekci biotinylovaných sond. Kit je optimalizován tak, aby reprodukovatelně zajistil vysokou citlivost s nízkým pozadím v aplikacích, jako jsou například Southern, Northen, dot a slot bloty, a skríning virových plaků a bakteriálních kolonií. Biotinylace DNA/RNA sond je široce používána jako bezpečná a pohodlná alternativa k radioaktivnímu značení. Biotin může být začleněn do nukleových kyselin za použití různých enzymatických nebo neenzymatických metod, jako je Biotin DecaLabel DNA Labeling Kit.
Biotinylované sondy jsou detekovány streptavidinem konjugovaným s alkalickou fosfatázou (AP). Streptavidin-AP konjugáty se specificky a nevratně váží na sondy značené biotinem. Sondy jsou pak vizualizovány za použití chromogenního substrátu BCIP/NBT pro alkalickou fosfatázu, který produkuje modro-fialovou sraženinu. Vizualizace NK nevyžaduje použití rentgenového filmu nebo jiné zvláštní vybavení.
Southern, Northen, dot a slot bloty, skríning virových plaků a bakteriálních kolonií.
Thermo Scientific Biotin DecaLabel DNA Labeling Kit je moderní systém pro efektivní syntézu DNA sond značených biotinem. Je založen na zlepšené metodě značení pomocí náhodných primerů (random primers), která byla vyvinuta podle Feinberga a Vogelsteina. Primární zlepšení oproti tradiční metodě random-primer značení je použití náhodných dekamerů místo hexamerů, což zajišťuje efektivnější hybridizaci primerů s DNA při teplotě 37 °C.
Klenowův Fragment, exo-, který je součástí kitu, je geneticky modifikovaný enzym s nulovou exonukleázovou aktivitou. Enzym proto nedegraduje značené sondy v průběhu reakce, což má za následek vysoký výtěžek značení i s nízkým množstvím templátu. Můžete jednotně označit všechny fragmenty DNA jakékoliv délky.
Tvorba DNA sond značených biotinem pro různé experimenty zahrnující neradioaktivní hybridizaci, včetně Southern a Northern blotů, hybridizace kolonií / plaků, dot / slot blotů, in situ hybridizace.
Thermo Scientific DecaLabel DNA Labeling Kit je moderní systém pro rychlou syntézu radioaktivně značených DNA sond s vysoce specifickou aktivitou. Kit je založen na zlepšené metodě značení pomocí náhodných primerů (random primers), která byla vyvinuta podle Feinberga a Vogelsteina.
Primární zlepšení oproti tradiční metodě random-primer značení je použití náhodných dekamerů místo hexamerů, což zajišťuje efektivnější hybridizaci primerů s DNA při teplotě 37 °C. Klenowův Fragment, exo-, který je součástí kitu, je geneticky modifikovaný enzym s nulovou exonukleázovou aktivitou. Enzym proto nedegraduje značené sondy v průběhu reakce, což má za následek vysoký výtěžek značení i s nízkým množstvím templátu. Můžete jednotně označit všechny fragmenty DNA jakékoliv délky. Dvě značící směsi jsou dodávány pro flexibilní použití buď radioaktivně značeného dATP nebo dCTP.
Tvorba radioaktivně značených DNA sond pro různé experimenty zahrnující hybridizaci: Southern a Northern bloty, hybridizace kolonií / plaků, dot / slot bloty, in situ hybridizace.